與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPLC所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。

 

    液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)， 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)， 在兩相中作相對運動時， 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程， 各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別， 被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出， 通過檢測器時， 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

 

    液相色譜法的工作原理是儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時,經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

 

    液相色譜分析法(HPLC)，它的基本概念及理論基礎(chǔ)（如保留值、塔板理論、速率理論、容量因子、分離度等），與氣相色譜 是一致的，但又有不同之處：液相色譜 與氣相色譜的主要區(qū)別可歸結(jié)于以下幾點：

 

    進(jìn)樣方式的不同：液相色譜只要將樣品制成溶液，而氣相色譜需加熱氣化或裂解；

 

    流動相的不同，在被測組分與流動相之間、流動相與固定相之間都存在著一定的相互作用力；

 

    由于液體的粘度較氣體大兩個數(shù)量級，使被測組分在液體流動相中的擴散系數(shù)比在氣體流動相中約小4~5個數(shù)量級；

 

    由于流動相的化學(xué)成分可進(jìn)行廣泛選擇，并可配置成二元或多元體系，滿足梯度洗脫的需要，因而提高了液相色譜的分辨率（柱效能）；

 

    液相色譜采用5~10Lm細(xì)顆粒固定相，使流體相在色譜柱上滲透性大大縮小，流動阻力增大，必須借助高壓泵輸送流動相；

 

    液相色譜是在液相中進(jìn)行，對被測組分的檢測，通常采用靈敏的濕法光度檢測器，例如，紫外光度檢測器、示差折光檢測器 、熒光光度檢測器等；

 

    液相色譜與氣相色譜相比較，液相色譜同樣具有高靈敏度、能和高速度的特點。

 

    液相色譜儀的定性和定量分析，與氣相色譜分析相似，在定性分析中，采用保留值定性，或與其他定性能力強的儀器分析 法連用；在定量分析中，采用測量峰面積的歸一化法、內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法等，但液相色譜在分離復(fù)雜組分式樣時，有些組分常不能出峰，因此歸一化法定量受到限制，而內(nèi)標(biāo)法定量則被廣泛使用。